提起细胞培养,众多小伙伴都倍感头大。劳心费神只愿他们长得漂漂亮亮的,奈何现实总是充满种种意外,稍不留神,细胞不是染菌了就是活力不好......赛业OriCell细胞学院交流群的小伙伴们,就经常遇到这些问题。
正所谓漂亮的细胞总是相似的,而狗带的细胞各有各的精彩。正逢一年一度的赛业OriCell第三届细胞培养图片大赛,我们征集了群里小伙伴们的建议,这次的比赛不仅比谁养得细胞更漂亮,还比谁养细胞更惨,让大家从成功和失败正反双面总结细胞培养的经验教训。快来参加“OriCell第三届细胞培养图片大赛”吧,在分享经验造福广大科研汪的同时,还可以赢得心动大奖。
如何报名
您在养细胞的路上总有或多或少的心得体会,分享一下您培养细胞成功或失败的经验,就有机会赢得心动大奖哦!快扫描下方二维码报名参加吧!
奖品
大赛日程
投稿时间:2020年11月3日—2020年11月15日
初选时间:2020年11月16日—2020年11月17日
投票时间:2020年11月18日—2020年11月30日
获奖公示:2020年12月2日
评选规则
1. 初选:主办方将组织专业的评审委员对提交的参赛作品进行初选,根据作品的“艺术性”、“科学性”、“清晰度”评选出40张入选作品,漂亮组和悲催组各20张;
2. 投票:入选的40张作品将会在网页展示并进行为期十二天的投票(每人只可投一次),每一票记一分。使用恶意软件刷票者视为自动弃权。
3. 终选:投票分数×40%+评审分数×60%(评审分数为100分制,其中艺术性占50分,科学性占50分),按分数高低甄选出一二三等奖。
作品示例
姓名: 李萌
作品名称:最丑小丑鱼
作品描述:此细胞图片来自于45天的血管类器官与87天的大脑类器官的融合,这是一次创新性的尝试,血管的成功融合可以为大脑类器官提供更丰富的营养,帮助其运输营养物质到3D球体内部,类器官体积和结构更大更复杂。人源胚胎干细胞经过定向诱导、在血管类器官13天大脑类器官55天时用胶体包被在一起、之后再成熟培养从而逐渐长的3D细胞球。血管类器官采用前沿文献发表的血管分化培养方法培养至13天再融合。在生长过程中它们逐渐融合,呈现出两种细胞混合的形状。这是通过切片、免疫荧光染色、共聚焦显微镜拍摄得到清晰而结构分明的图片。图中蓝色为DAPI染色得到的细胞核形态,颗粒分明,外侧显示更加清晰明亮;红色是Ki67,反 映细胞增殖状况,绿色为caspase-3反应细胞凋亡状况。该图片拍摄的是融合类器官整体的形貌,从图中可以看到,融合类器官增殖旺盛,而凋亡较少,仅在空泡处出现凋亡情况。
赛业专家们的小建议
A. 复苏小妙招
复苏过程非常关键,直接影响这一株细胞的生长状态和传代能力。一般而言,复苏就是将细胞株从液氮中拿出来后立刻放入-80°C冰箱数分钟,待液氮挥发后迅速放入37℃振荡水浴,俗称“快融”过程,这一过程就是尽快融解细胞内的冰晶,减少对细胞的损伤。下一步就是将细胞放入培养基,一种方法是直接加入到培养基,待第二天细胞贴壁后更换新鲜的培养基;第二种方法是加入数倍体积的培养基混匀后,低速离心去掉对细胞有毒害作用的DMSO,然后把细胞接种到培养皿中。
B. 消化过程注意事项
消化过程会破坏细胞表面蛋白,从而影响细胞状态。目前使用较多的操作是,吸走培养基后先用PBS洗1-2遍,然后加入胰酶进行消化,消化到细胞变圆、少量细胞脱落即可加入培养基进行终止。接下来是离心,除去上清。加入适量培养基将细胞吹匀,再转移到培养皿的过程也很关键。吹打过程中用力要适度,既要避免用力过小细胞未分散,又要避免用力过大细胞悬液沾黏管壁造成损失,还要避免吹打过多机械剪切力伤害细胞。接种细胞后要适度摇晃培养容器,让细胞分布均匀。对于接种的细胞,在空间允许的条件下,尽量平放不要堆着放。此外,关培养箱时需尽量轻柔,有时候细胞出现同心圆分布的情况,就是由于关门太用力,导致培养基晃动,形成纹路。
C. 冻存注意事项
一般情况下,冻存的细胞越多越好。培养中的细胞,建议在细胞状态好、增殖迅速时就冻存一些,而不是养过很多代用不完再冻存。细胞消化离心去上清后加入细胞无蛋白非程序冻存液调整密度到1×106 cell/mL,然后转入冻存管,直接放入-80℃冷冻过夜,注意冻存管摆放不能过于密集,以免处于内部位置的细胞冻存效果差。冻存完成后转入液氮中长期保存。细胞不要长期保存在-80℃冰箱,以免活力下降。
D. 其他注意事项
除上述的主要操作步骤以外,常用的试剂存储也很重要。FBS正常存储温度是-20℃,在要使用之前先放到4℃融化,如果放到室温或者水浴锅中融解,血清中的蛋白会大量析出从而影响培养效果。另外胰酶需尽量分装保存,胰酶在室温下失活很快,近期用的放在4℃,其他就存储在-20℃。最后就是细胞需要及时传代和换液,通常为2-3天一次。过于频繁会影响细胞生成长微环境,间隔过长则会有营养匮乏、酸碱度失衡等问题。