实验心得_实验心得

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Experimental experience

从去年11月开题&＃xff0c;我和我的搭档闵细细就开始计划实验的事情&＃xff0c;开展了一系列准备工作&＃xff0c;整理临床信息&＃xff0c;通过伦理审查&＃xff0c;收集血液&＃xff0c;到现在快一年了。刚开始&＃xff0c;我们都怀着紧张、激动的心情走进未知的实验室大门&＃xff0c;实验室里师兄师姐们正如火如荼地进行严谨地实验操作。我们带着求知的欲望向实验室里的老师们请教&＃xff0c;叶主任很耐心地给我们讲解&＃xff0c;并安排徐捷老师带着我们一步一步地进行实验操作。

我们实验的主要操作是qRT-PCR。这个实验我将其分为四大步骤&＃xff0c;第一步&＃xff0c;提取单核细胞&＃xff1b;第二部&＃xff1a;提取RNA与纯度检测&＃xff1b;第三部&＃xff1a;逆转录&＃xff1b;第四部&＃xff1a;PCR扩增。

每一步我们都列出实验所需的试剂、试管、试验器材以及实验所需经费。并把每一步骤提前记录下来&＃xff0c;熟悉流程。第一天&＃xff0c;徐老师教我们提取单核细胞&＃xff0c;这个步骤很简单&＃xff0c;主要是需要学会使用离心机&＃xff0c;调整好离心时间、转速及温度。这个我们很容易就学会了。

但是&＃xff0c;我们知道这只是开始&＃xff0c;后面才是重点。

在提取RNA的时候&＃xff0c;我们遇到了很多困难&＃xff0c;结果很不理想&＃xff0c;要么RNA的浓度太低&＃xff0c;要么就是纯度不合格&＃xff0c;有时候甚至沉淀不溶解。我感到很困惑&＃xff0c;于是&＃xff0c;我们反复回想徐老师提取时的步骤&＃xff0c;然后认真又做了一遍&＃xff0c;结果仍然不达标。这时&＃xff0c;我和细细讨论着把每一步所需要注意的问题写在实验记录本上&＃xff0c;以免我们进行实验时忽略。

实验记录如下&＃xff1a;

1.混匀问题&＃xff0c;每次加入其他试剂时&＃xff0c;一定要记得混匀&＃xff1b;2、交叉使用问题&＃xff0c;用过的枪头要尽量扔掉&＃xff0c;不能污染后面的试剂&＃xff1b;3&＃xff0c;加入试剂的细节问题&＃xff0c;加试剂时尽量靠着管壁&＃xff0c;这样可避免试剂加入过程中液体溅出&＃xff1b;4、移液枪的使用问题&＃xff0c;吸入试剂的时候不要将枪柄按到最底部&＃xff0c;而加入试剂时尽量按到最底部。5、污染问题&＃xff0c;所有操作过程都应佩戴手套&＃xff0c;因RNA很容易降解&＃xff0c;这样可避免因不小心触碰而造成污染。6、冰上操作&＃xff0c;所有实验流程尽量在冰上操作&＃xff0c;这样可延缓RNA的降解速度。

最后我们总结了适合我们自己的一套实验步骤&＃xff0c;按照这个步骤操作下来&＃xff0c;我们提取的RNA质量明显较之前高多了。果然&＃xff0c;实验是需要去探索的。下图是我们做过的最成功的一次&＃xff0c;总算攻克了这一难题。之后就要设计引物&＃xff0c;开始做后面的步骤了&＃xff0c;但是我相信&＃xff0c;在我们不断摸索和创新下&＃xff0c;我们一定能成功地完成实验&＃xff0c;得到我们想要的实验结果。

END

作者&＃xff5c;2018级内科基地 杜娜

导师&＃xff5c;肾病内科 邹春波

编辑&＃xff1a;李倩茜 | 审核&＃xff1a;教育处